阿霉素( Doxorubicin，Dox) 又名多柔比星，是一 種蒽環(huán)類糖苷化合物，臨床上多用其鹽酸鹽。阿霉 素主要通過嵌入 DNA 抑制核酸的合成，起到殺滅細 胞的效果。Dox 是一類廣譜的抗腫瘤藥物，臨床 上被廣泛用于治療急性白血病、霍奇金和非霍奇 金淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、 肝癌等多種惡性腫瘤。Dox 的主要不良反應(yīng)常表 現(xiàn)為心臟毒性、骨髓毒性、抑制免疫功能以及惡心、 嘔吐等。因其不良反應(yīng)較大，臨床上多將其作 為二線藥物。硫酸軟骨素( CS) 具有抗氧化、抗 炎、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等藥理活性， 目前用于防治心腦血管疾病、骨關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)保護 等。我們采用 CS 修飾 Dox 可以賦予 Dox 良好的腫瘤靶向性，提高 Dox 的靶向性和生物利用度，在降低 其不良反應(yīng)的同時增強了 Dox 的抗腫瘤效果。

豬 CS 111014-01( Mw = 17. 5 kDa，華懋雙匯實 業(yè)( 集團) 有限公司生物化學(xué)制藥廠) ; 低分子量豬 ( Mw = 4. 1 kDa，自制) ; Dox·HCl( 97% ，北京偶合 試劑有限公司) ，CS-Dox( 自制) ，乙二胺四乙酸二鈉 ( 分析純，國藥試劑有限公司) 。其他試劑均為國產(chǎn) 分析純。

Cary Eclipse 熒光分光光度計( 美國 Varian 公 司) ，TF-FD-1 冷凍干燥機( 上海田楓實業(yè)有限公 司) ，Vortex QL-902 渦旋儀( 江蘇海門其林貝爾儀器 制造有限公司) 。 1. 3 實驗動物 SD 大鼠( 雄性，200 ± 20 g) ，購買于濟南朋悅實 驗動物繁育有限公司。( 許可證號: SCXK( 魯) 2014- 0007)

選用熒光分光光度法測量血漿中 Dox 的含量。 Ex 480 nm，Em 500 ～ 800 nm 掃描，可以得到在 Em 593 nm 處有較高峰，故本實驗檢測條件選用 Ex 480 nm，Em 593 nm，激發(fā)與發(fā)射狹縫均設(shè)定為 10 nm。

實驗前 SD 大鼠禁食不禁水 12 h，實驗大鼠乙 醚麻醉，眼內(nèi)眥取血，采集的空白血液標(biāo)本放入到裝 有 EDTA 二鈉的離心管中，3000 r/min 離心 10 min， 取上清，即得空白血漿樣品。

精密稱取 Dox·HCl 1. 25 mg 加水定容到 25 ml 的容量瓶中，配制 50 μg /ml 的 Dox 溶液作為儲備 液。精密吸取儲備液( 0. 04 ml、0. 10 ml、0. 20 ml、 0. 40 ml、1. 00 ml、2. 00 ml、4. 00 ml、6. 00 ml) 放入10 ml 容量瓶中加水定容，配制相應(yīng)濃度( 0. 2 μg /ml、 0. 5 μg /ml、1、2 μg /ml、5 μg /ml、10 μg /ml、20 μg / ml、30 μg /ml) 的 Dox 溶液，4 ℃避光保存待用。

精密吸取 8 份大鼠空白血漿 200 μl 放入 1. 5 ml 離心管中，每個離心管中分別加入不同濃度的鹽 Dox 溶液 200 μl，渦旋混勻，使得血漿中 Dox 的濃度 分別為 0. 1 μg /ml、0. 25 μg /ml、0. 50 μg /ml、1. 00 μg /ml、2. 00 μg /ml、5. 00 μg /ml、10. 00 μg /ml、 15. 00 μg /ml。在 2. 1 中的檢測條件下測定熒光強 度值。以溶液濃度為橫坐標(biāo)，最終熒光強度值( Y) 為縱坐標(biāo)，繪出其熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線并求得工作曲線的 回歸方程。

取大鼠空白血漿 200 μl，1∶ 1 加入低、中、高三 種濃度的 Dox 溶液，配制 Dox 濃度分別為 0. 25 μg / ml、5. 00 μg /ml、15. 00 μg /ml 的血漿樣品。將血漿樣品按 2. 4 中的處理方法處理測定其熒光強度，每 3 h 測定 1 次，測 3 次，計算日內(nèi)精密度，連續(xù)測量三天，計算日間精密度。

將配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液放入熒光分光光度計中 測量得到 593 nm 處的熒光強度值，以溶液濃度為橫 坐標(biāo)，最終熒光強度值( Y) 為縱坐標(biāo)，繪出其熒光標(biāo) 準(zhǔn)曲線( 見圖 1) ，并求得工作曲線的回歸方程: Y = 16. 944X + 0. 6796 ( Ｒ2 = 0. 9997 ) 。結(jié) 果 表 明，Dox 在 0. 1 ～ 15 μg /ml 的濃度范圍內(nèi)，熒光強度值與濃 度線性關(guān)系良好。從 表中可知阿霉素血漿溶液日內(nèi) ＲSD 值小于 3% ，表 示該檢測方法測定的日內(nèi)精密度良好。從表中可知，Dox 血漿溶液日間 ＲSD 值小于 3% ，表示 該檢測方法測定的日間精密度良好。對空白血漿、Dox 水溶液和 Dox 血漿溶液進行 熒光發(fā)射圖譜掃描，從圖中我們可 以看出，5 μg /ml Dox 血漿溶液的熒光發(fā)射圖譜與 5μg /ml Dox 血漿溶液水溶液的熒光發(fā)射圖譜，基本 重合，說明方法可行。血漿中 Dox 穩(wěn)定存在，熒光圖 譜為 Dox 專屬。

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